DB43/T 3239-2025 豆类朱砂叶螨抗药性测定技术规程

　　ICS 65.020 CCS B 16

　　43

　　湖 南 省 地 方 标 准

　　DB 43/T 3239—2025

　　豆类朱砂叶螨抗药性测定技术规程

　　Code of practice for determination of Tetranychus cinnbarinus resistance to pestcides

　　on beans

　　2025 - 07 - 18 发布 2025 - 10 - 18 实施

　　湖南省市场监督管理局 发 布

　　前

　　本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则

　　言

　　第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

　　起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由湖南省农业农村厅提出。

　　本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。

　　本文件起草单位：湖南人文科技学院、湖南省农业科学院、中国农业科学院、岳麓山实验室、湖南农业大学、娄底市农科所、长沙市农业技术推广中心、宁乡市农业技术推广中心、娄底市植保植检站。

　　本文件主要起草人：郑慧新、金晨钟、王培、吴青君、刘秀、方勇、朱赞江、姚艳红、徐灵超、颜健红、卢小舟、杨中侠、符伟、史晓斌、唐涛、李意成、郭开发、张尚志、周静、虢婷婷、谢梵、周怀博。

　　豆类朱砂叶螨抗药性测定技术规程

　　1 范围

　　本文件规定了豆类朱砂叶螨抗药性测定的仪器设备、试剂与材料、抗药性测定方法、统计分析、抗性评估等技术要求。

　　本文件适用于叶片浸渍法测定豆类作物上朱砂叶螨的抗药性。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　NY/T 1154.14 农药室内生物测定试验准则 杀虫剂第 14 部分：浸叶法

　　NY/T 3539 叶螨抗药性技术监测规程

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3. 1

　　叶片浸渍法 leaf-dipping method

　　将叶片浸没于农药药液后，放置在琼脂上，接入待测昆虫进行毒理测定的方法。

　　3.2

　　抗药性 resistance

　　昆虫具有忍受杀死正常种群大多数个体的药量的能力在其种群中发展起来的现象。

　　3. 3

　　敏感基线 susceptibility baseline

　　通过生物测定方法得到的害螨种群对药剂的剂量反应曲线。

　　3. 4

　　致死中浓度(LC50)

　　药剂杀死害螨群体中一半个体所需要的药剂浓度。

　　4 仪器设备

　　电子天平(0.1 mg)、烧杯、量筒、培养皿、微波炉、打孔器、移液枪或移液器、毛笔、人工气候培养箱。

　　5 试剂与材料

　　5. 1 生物材料

　　供试害螨：采集自田间蔬菜作物上朱砂叶螨成螨。

　　供试作物：未接触任何农药的蔬菜叶片。

　　5. 2 试验药剂

　　杀螨剂原药或制剂，制剂需注明通用名、商品名、有效成分含量、生产产家。

　　5.3 试验试剂

　　丙酮、二甲基亚砜、曲拉通 X 100、吐温- 80、蒸馏水、琼脂粉。

　　5.4 无虫苗培养

　　将营养土湿润后放入育苗盘，将蔬菜种子埋入空穴中进行培养，培养条件为温度(26±1) ℃,相对湿度(60±5)%，光照周期 16 h:8 h(L:D)，待蔬菜种子发育至两片真叶期后分苗待用，整个培养周期不接触任何农药。

　　6 抗药性测定方法

　　6. 1 试虫采集与饲养

　　按照随机抽样原则，在蔬菜作物上采集朱砂叶螨成螨，在室内人工气候培养箱内饲养，设定培养箱温度(26±1)℃,相对湿度(60±5)%，光照周期 16 h:8 h(L:D)，待测叶螨采用无虫苗植株饲养，或使用无虫苗叶片在培养皿(9 cm)中饲养。当叶片被取食至红色斑点占叶面 l/3 或叶片枯黄时更换无虫苗和新鲜叶片。

　　6.2 药剂配制

　　6.2.1 试验制剂配制

　　用电子天平称量适量制剂，用去离子水或蒸馏水溶解后，等比稀释待用，以去离子水或蒸馏水作为空白对照。

　　6.2.2 试验原药配制

　　用电子天平称量适量试验原药，原药用丙酮或二甲基亚砜溶解后，加入含有 0.01 %曲拉通 X 100 或吐温- 80 的蒸馏水溶解，等比稀释待用，以加入含有 0.01 %曲拉通 X 100 或吐温- 80 的蒸馏水作为空白对照。

　　6.3 琼脂培养基制备

　　配置浓度为 1 %的琼脂培养基，用电子称量适量琼脂粉至蒸馏水中，用微波炉充分煮沸形成液体琼脂，未凝固前倒入 3 cm培养皿中，待冷却凝固后使用。

　　6.4 浸叶

　　采用长势一致、未接触过任何农药的蔬菜叶片，用打孔器打出直径为 3 cm 的叶碟，将叶碟在配置好的药液中浸泡 10 s 后取出，将叶碟晾干后背面朝上平铺在装有凝固琼脂的培养皿中。将叶碟按照空白对照、药液浓度从低到高的顺序浸叶，每个浓度重复 4 次。

　　6.5 接螨

　　用毛笔挑选 20 头～30 头健康朱砂叶螨雌成螨至培养皿，盖好培养皿后放置于人工气候培养箱饲养观察。

　　6.6 结果检查

　　药剂处理 24 h 后检查朱砂叶螨死亡情况，用毛笔轻触不动的朱砂叶螨视为死亡，记录每个培养皿的朱砂叶螨活虫数及死亡数。

　　7 统计分析

　　7. 1 统计分析

　　采用统计分析软件对试验结果进行概率值分析，计算各药剂的 LC50 、95 %置信区间、斜率、标准误等。

　　7.2 死亡率计算方法

　　根据调查数据，计算各处理的校正死亡率。按照公式(1)和(2)计算，计算结果保留小数点后两位：

　　P ·········································································(1)

　　式中：

　　P——死亡率;

　　K——每处理浓度总死亡虫数，单位为头;

　　N——每处理浓度总虫数，单位为头。

　　P1 = × 100%····································································(2)

　　式中：

　　P1——校正死亡率;

　　P2——处理组死亡率;

　　P3——对照组死亡率。

　　在试验过程中，对照死亡率在 5 %以下无需校正;对照死亡率在 5 %～20 %，按照公式(2)进行校正;对照死亡率超过 20 % ，试验需重做。

　　7.3 统计分析

　　采用统计分析等软件对试验结果进行概率值分析，计算各药剂的 LC50 、95 %置信区间、斜率、标准误等。

　　8 抗性评估

　　8. 1 敏感基线制定

　　朱砂叶螨的敏感基线见附录 A。

　　8.2 抗性倍数计算

　　根据敏感种群的 LC50，按公式(3)计算待测种群的抗性倍数。

　　RR = ··············································································· (3)

　　式中：

　　RR——待测种群的抗性倍数;

　　T——待测种群的 LC50;

　　S——敏感种群 LC50。

　　8.3 抗性水平分级与评估

　　根据抗药性倍数(RR)计算结果，按照表 1 中抗药性水平的分级标准，对待测种群的抗药性作出评估。

　　A

　　A

　　附 录 A

　　(资料性)

　　朱砂叶螨对部分常用杀螨剂的敏感基线

　　表 A.1 给出了朱砂叶螨对部分常用杀螨剂的敏感基线。

　　表A.1 朱砂叶螨对部分常用杀螨剂的敏感基线