DB43/T 3265-2025 饲料中141种药物及化合物的快速测定 液相色谱串联质谱法

　　ICS 65.120 CCS B 46

　　43

　　湖 南 省 地 方 标 准

　　DB 43/T 3265—2025

　　饲料中 141 种药物及化合物的快速测定 液

　　相色谱串联质谱法

　　Rapid determination of 141 drugs and compounds in feeds - LC-MS/MS

　　2025 - 07 - 18 发布 2025 - 10 - 18 实施

　　湖南省市场监督管理局 发 布

　　前 言

　　本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由湖南省农业农村厅提出。

　　本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。

　　本文件起草单位：湖南省兽药饲料监察所、衡阳市畜牧水产事务中心、长沙海关技术中心、湖南生物机电职业技术学院、怀化职业技术学院、吐鲁番市农产品质量安全监督检验检测中心。

　　本文件主要起草人：谭美英、隆雪明、周灿、刘曙光、江燕、张仲珍、肖兴、易建希、杨彦宁、胡忆文、张港、周玉洁、邓钧红、周汝顺、张瑞祺、西尔力•阿不都热哈曼、蒋小玲、刘干军、唐金花、赵映琴、郭青春、欧阳小鸿。

　　饲料中 141 种药物及化合物的快速测定 液相色谱串联质谱法

　　1 范围

　　本文件描述了饲料中 141 种药物及化合物的快速测定的原理、试剂和材料、仪器和设备、试样制备与保存、试验、试验数据处理和检测方法的灵敏度、准确度和精密度。

　　本文件适用于配合饲料中 141 种药物及化合物(见附录 A)含量的测定，其他饲料参照使用。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　GB/T 20195 动物饲料 试样的制备

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义。

　　4 原理

　　试样用甲酸乙腈水溶液提取，经净化包净化，液相色谱串联质谱法测定，外标法定量。

　　5 试剂和材料

　　5. 1 试剂

　　5.1.1 水：应符合 GB/T 6682 规定的一级水。

　　5.1.2 乙腈：色谱纯。

　　5.1.3 甲酸：色谱纯。

　　5.1.4 乙酸铵：色谱纯。

　　5.1.5 甲醇：色谱纯。

　　5.1.6 正已烷：分析纯。

　　5. 2 溶液配制

　　5.2.1 0.1%甲酸水溶液：取 1 mL 甲酸用水稀释至 1000 mL。

　　5.2.2 0.1%甲酸乙腈复溶液(0.1%甲酸水溶液:乙腈=9:1)。

　　5.2.3 1%甲酸乙腈提取液(甲酸:水:乙腈=1:20:79)。

　　5.2.4 0.1%甲酸乙酸铵溶液：分别称取 0.154 g 乙酸铵用水溶解，置于 1000 mL 容量瓶中，加入 1 mL甲酸，用水稀释并定容至刻度，摇匀，过 0.22 μm 微孔滤膜备用。

　　5.3 标准品

　　141 种药物及化合物的中英文名称、化学文摘(CAS)、分子式等信息见附录 A。

　　5.4 标准溶液的配制

　　5.4.1 标准储备液(100 μg/mL)：分别精密称取(精确至 0.01 mg)标准品，采用附录 A 中对应溶剂配制成 100 μg/mL 的标准储备溶液。-18℃及以下避光保存。

　　5.4.2 混合标准中间液(5 μg/mL)：按照附录 A 中化合物的类别，移取每个类别中每种化合物的标准储备液各 500 μL 于 10 mL 棕色容量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，配成浓度为 5 μg/mL 的兴奋剂类、大环内酯类、磺胺类、激素类、驱虫类、四环素类、抗病毒类、喹诺酮类、青霉素类及头孢类、农药、增效剂、酰胺醇类、解热镇痛类、林可酰胺类、硝基呋喃类和其他共 17 类混合标准中间液。现配现用。

　　5.4.3 混合标准工作液：分别准确移取适量的混合标准中间液，用基质空白溶液稀释成系列标准工作溶液。现配现用。

　　5.5 材料

　　5.5.1 净化包：100 mg 二氧化锆微球+100 mg 亲脂的二乙烯基苯和亲水的N-乙烯基吡咯烷酮聚合物。

　　5.5.2 微孔滤膜：0.22 μm，尼龙膜。

　　6 仪器和设备

　　6. 1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。

　　6.2 分析天平：感量 0.000 01 g 和 0.001 g。

　　6.3 离心机：转速不低于 8000 r/min。

　　6.4 涡旋混匀器。

　　6.5 涡旋振荡器。

　　6.6 氮吹仪。

　　7 试样制备与保存

　　按 GB/T 20195 制备样品，至少 200 g，粉碎过 0.425 mm孔径的试验筛，充分混匀，避光密闭保存。

　　8 试验

　　8.1 提取

　　称取试样 2 g(精确到 0.001 g)，置于 50 mL 离心管中，加入 10.00 mL 1%甲酸乙腈提取液，涡旋振荡 10 min ，8000 r/min 离心 5 min，移取上清液置另一个 50 mL 离心管中，重复提取一次，合并上清液摇匀，备用。

　　8.2 净化

　　取备用液 10 mL 加入净化包，振摇 10 min ，10000 r/min 离心 5 min，移取 2.00 mL 上清液于 10 mL刻度试管中，40 ℃氮气吹干，加入 1.00 mL 0.1%甲酸水乙腈复溶液，涡旋溶解，用3 mL 正已烷萃取，取下层溶液过微孔滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。

　　8.3 标准曲线制备

　　精密移取混合标准中间液适量，分别加入 6 份经提取和净化的空白试液中，40 ℃氮气吹干，加入0.1%甲酸乙腈复溶液 1.00 mL，涡旋溶解，配制成浓度为 2 μg/L，10 μg/L，20 μg/L，50 μg/L，100 μg/L， 200 μg/L 的基质匹配系列标准溶液，过微孔滤膜，液相色谱-串联质谱测定。以测得的特征离子峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求得线性回归方程和相关系数。

　　8.4 测定

　　8.4.1 液相色谱参考条件

　　液相色谱参考条件如下：

　　a) 色谱柱：C18(150 mm×2.1 mm，1.6 μm)，或者相当;

　　b) 柱温：40 ℃ ;

　　c) 流速：0.3 mL/min;

　　d) 进样量：5 μL;

　　e) 流动相：A 相为 0.1%甲酸乙酸铵溶液，B 相为乙腈，流动相梯度洗脱程序见表 1。

　　表1 流动相梯度洗脱程序

　　8.4.2 质谱参考条件

　　质谱参考条件如下：

　　a) 离子源：电喷雾离子源;

　　b) 扫描方式：正离子扫描/负离子扫描;

　　c) 检测方式：多反应监测;

　　d) 定性定量离子对及去簇电压、碰撞能量见附录 A;

　　e) 质谱仪器参数见表 2。

　　表2 质谱仪器参数

　　表2 质谱仪器参数(续)

　　8.5 定性检测

　　在相同测试条件下，试样中待测物的保留时间与标准工作液中待测物的保留时间一致，偏差在±2.5%以内，且试样中待测物定性离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液对应的定性离子的相对丰度一致。其允许偏差应符合表 3 的要求。

　　表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

　　8.6 定量测定

　　按 8.4.1 和 8.4.2 设定仪器条件，取标准工作溶液、试样溶液、空白试样溶液等体积进样测定，外标法定量。标准工作溶液和试样溶液中目标物的响应值均应在仪器检测线性范围内。

　　8. 7 空白试验

　　取空白试样，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。

　　9 试验数据处理

　　试样中待测物的含量以质量分数 ω 计，单位以毫克每千克(mg/kg)表示。多点校准按公式(1)计算;单点校准按公式(2)计算：

　　w f ······································································· (1)

　　式中：

　　P——试样溶液待测化合物的质量浓度，单位为微克每升(μg/L);

　　V——最终定容的体积，单位为毫升(mL);

　　m——试样质量，单位为克(g);

　　f——稀释倍数;

　　1000——换算系数。

　　w f ·····································································

　　式中：

　　P——标准溶液中待测化合物的质量浓度，单位为微克每升(μg/L);

　　Ai——试样溶液中待测化合物的色谱峰面积;

　　V——最终定容的体积，单位为毫升(mL);

　　As——标准溶液中待测化合物的色谱峰面积;

　　m——试样质量，单位为克(g);

　　f——稀释倍数;

　　1000——换算系数。

　　测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留 3 位有效数字。

　　10 检测方法的灵敏度、准确度和精密度

　　10. 1 灵敏度

　　本方法中 141 种药物及化合物的定量限见附录 A。

　　10. 2 准确度

　　本方法在 0.05 mg/kg～1 mg/kg 添加浓度水平上的添加回收率为 60%～120%。

　　10. 3 精密度

　　本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤20%。

　　A

　　A

　　附 录 A

　　(资料性)

　　141 种药物及化合物的基本信息、质谱参数、保留时间和定量限

　　141种药物及化合物的基本信息、质谱参数、保留时间和定量限见表A.1。

　　表A.1 141 种药物及化合物基本信息、质谱参数、保留时间和定量限

　　表A.1 141 种药物及化合物基本信息、质谱参数、保留时间和定量限(续)

　　表A.1 141 种药物及化合物基本信息、质谱参数、保留时间和定量限(续)

　　表A.1 141 种药物及化合物基本信息、质谱参数、保留时间和定量限(续)

　　表A.1 141 种药物及化合物基本信息、质谱参数、保留时间和定量限(续)

　　表A.1 141 种药物及化合物基本信息、质谱参数、保留时间和定量限(续)

　　表A.1 141 种药物及化合物基本信息、质谱参数、保留时间和定量限(续)

　　表A.1 141 种药物及化合物基本信息、质谱参数、保留时间和定量限(续)