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ICS 67.050 CCS X 55
43
湖 南 省 地 方 标 准
DB 43/T 3267—2025
茶叶中百菌清、克菌丹残留量的测定
气相色谱-质谱/质谱法
Determination of chlorothalonil and captan residues in tea-
Gas chromatography-tandem mass spectroscopy
2025 - 07 - 18 发布 2025 - 10 - 18 实施
湖南省市场监督管理局 发 布
前 言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由湖南省农业农村厅提出。
本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。
本文件起草单位：长沙海关技术中心、湖南农业大学、长沙市农业科学研究院、湖南省产商品评审中心、中国农业科学院茶叶研究所、长沙市农业科学研究院。
本文件主要起草人：焦艳娜、刘仲华、付善良、陆静、吴景、陈诚、周利、罗宗秀、刘蕙萍、刘宏伟、范叶。
茶叶中百菌清、克菌丹残留量的测定
气相色谱-质谱/质谱法
1 范围
本文件描述了茶叶中百菌清、克菌丹残留量的气相色谱-质谱/质谱测定方法。
本文件适用于茶叶中百菌清、克菌丹残留量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 方法原理
试样经酸化后，用丙酮-正己烷混合溶剂涡旋提取，固相萃取柱净化后，注入气相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。
5 试剂和材料
5. 1 水：GB/T 6682 规定的一级水。
5. 2 丙酮(C3H6O)：色谱纯。
5.3 正己烷(C6H14)：色谱纯。
5.4 丙酮-正己烷溶液(1+2，体积比)：量取 30 mL 丙酮和60 mL 正己烷至 100 mL 试剂瓶中，混匀。
5.5 磷酸(H3PO4 )：分析纯，浓度为 85%。
5.6 无水硫酸钠(Na2SO4)：分析纯，于 550 ℃马弗炉内烘烤 4 h，取出置于干燥器内，冷却至室温后装瓶备用。
5. 7 甲苯(C7H8)：色谱纯。
5.8 正己烷-甲苯溶液(3+1，体积比)：量取 600 mL 正己烷和 200 mL 甲苯至 1000 mL 试剂瓶中，混匀。
5.9 标准品：百菌清(Chlorothalonil ，CAS 号：1897-45-6，分子式：C8Cl4N2 )，纯度≥95.0%。克菌丹(Captan ，CAS 号：133-06-2，分子式：C9H8Cl3NO2S)，纯度≥99.0%。
5.10 标准储备溶液(1000 μg/mL)：分别准确称取适量百菌清和克菌丹标准品，用丙酮配制成浓度约为 1000 μg/mL 的标准储备溶液，-18 ℃以下避光保存，有效期 1 年。
5. 11 混合标准中间溶液(10.0 μg/mL)：分别移取上述标准储备液，用丙酮稀释成浓度为 10.0 μg/mL的混合标准中间溶液，-18 ℃以下避光保存，有效期 3 个月。
5. 12 混合标准工作溶液：根据需要将混合标准中间溶液用正己烷稀释成适当浓度的标准工作液，现用现配。
5. 13 石墨化炭黑小柱：250 mg/3 mL，或相当者。
6 仪器和设备
6. 1 气相色谱-质谱/质谱仪：配有电子轰击离子源(EI)。
6.2 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。
6.3 涡旋混匀器。
6.4 氮吹仪。
6.5 离心机：转速不低于 3 000 r/min。
6.6 固相萃取装置。
6.7 马弗炉。
7 试样的制备与保存
茶叶样品经粉碎机粉碎，过筛(孔径为 0.6 mm～1 mm)，混匀，密封并标记，于-18 ℃冷冻保存。
8 测定步骤
8.1 提取
称取 0.5 g 试样(精确至 0.01 g)于 15 mL 离心管中，加入 1.5 mL 水，0.1 mL 磷酸，涡旋混匀30 s，放置 20 min。加入 3 mL 丙酮-正己烷溶液，涡旋混匀 3 min 。3 000 r/min 离心 2 min。上清液转移至另一 15 mL 离心管中。再加入 2 mL 正己烷重复提取 2 次。合并上清液，40 ℃下氮吹浓缩至近干。用 2 mL 正己烷-甲苯溶液溶解残渣。
8.2 净化
在石墨化炭黑小柱上加约 0.5 cm 高无水硫酸钠。用 6 mL 正己烷-甲苯溶液活化，弃去流出液。将上述溶解液转移至小柱中，收集流出液。用 2 mL 正己烷-甲苯溶液分 3 次洗涤样液管内壁，将洗涤液并入小柱。再用 6 mL 正己烷-甲苯溶液洗脱(在整个活化、上样和洗脱过程中应避免 SPE 柱干涸)。合并流出液，40 ℃下氮吹浓缩至近干，用正己烷定容至 1 mL，涡旋混匀，供气相色谱-质谱/质谱仪测定。
8.3 标准曲线的制备
准确吸取一定量的混合标准中间溶液，用正己烷逐级稀释成质量浓度分别为 0.025 μg/mL ，0.050 μg/mL，0.10 μg/mL，0.20 μg/mL，0.50 μg/mL 和 1.0 μg/mL 的系列混合标准工作溶液，供气相色谱-质谱/质谱仪测定。以待测物的定量离子峰面积为纵坐标，对应的待测物标准溶液质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。
8.4 测定
8.4.1 气相色谱参考条件
气相色谱参考条件如下：
a) 色谱柱：35%苯基-65%甲基聚硅氧烷石英毛细管柱，30 m × 0.25 mm(内径)× 0.25 μm(膜厚)，或相当者;
b) 升温程序：60 ℃保持 1 min，以 35 ℃/min 程序升温至 300 ℃, 保持 5 min;
c) 载气：氦气，纯度≥99.999 %，流速 2.0 mL/min;
d) 进样口温度：230 ℃ ;
e) 进样量：1.0 μL;
f) 进样方式：脉冲不分流，脉冲压力 50 psi，时间 1.5 min。
8.4.2 质谱参考条件
质谱参考条件如下：
a) 传输线温度：280 ℃ ;
b) 电子轰击源：70 eV;
c) 离子源温度：230℃;
d) 监测方式：多反应离子监测(MRM)。
各待测物的保留时间、监测离子对及碰撞能见表 1。每个化合物提供了 2 个定性离子对，可依情况选择 1 个用于定性测定。
表1 待测物的保留时间、监测离子对及碰撞能
8.4.3 定性与定量
8.4.3.1 保留时间
在相同实验条件下，试样中待测物的保留时间与标准工作溶液中对应的保留时间偏差应在±2.5 %之内。
8.4.3.2 定量离子、定性离子及相对丰度比
在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物的监测离子对均出现，而且同一检测批次，对同一化合物，样品中目标化合物的定性离子和定量离子的相对丰度比，与质量浓度相当的标准溶液相比，其允许偏差不超过表2 规定的范围，则可判断样品中存在目标化合物。
表2 相对离子丰度的最大允许偏差
8.4.3.3 定量
将混合标准工作溶液和试样溶液依次注入气相色谱-质谱/质谱仪中，测得待测物定量离子峰面积，外标法定量。待测样液中待测物的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。百菌清和克菌丹混合标准溶液的多反应离子监测色谱图见附录 A。
8.5 空白实验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。
9 结果计算
试样中的待测物按公式(1)计算。计算结果需扣除空白值。
xi = ··········································································· (1)
式中：
xi—样品中待测物 i 的残留量，单位为毫克每千克(mg/kg);
Ai—样液中待测物i 的峰面积;
ci—标准工作溶液中待测物 i 的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);
V —样液最终定容体积，单位为毫升(mL);
Asi—标准工作溶液中待测物i 的峰面积;
m —最终样液所代表的试样质量，单位为克(g)。
10 定量限与回收率、精密度
10. 1 定量限
本方法百菌清、克菌丹的定量限均为 0.05 mg/kg。
10. 2 回收率
茶叶中添加不同浓度水平百菌清、克菌丹的回收率范围见附录 B。
10. 3 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 15%。
A
A
附 录 A
(资料性)
标准溶液的气相色谱-质谱/质谱多反应监测(MRM)色谱图
百菌清、克菌丹混合标准溶液多反应监测(MRM)色谱图见图 A.1。
图A.1 百菌清、克菌丹混合标准溶液多反应监测(MRM)色谱图
B
B
附 录 B
(资料性)
茶叶中百菌清、克菌丹的添加浓度和回收率
茶叶中百菌清和克菌丹的添加浓度和回收率见表B.1。
表B.1 茶叶中百菌清和克菌丹的添加浓度和回收率
