T/GXAS 1151-2025 人类辅助生殖技术实验室 卵胞浆内单精子显微注射技术操作规程

　　GXAS

　　团 体 标 准

　　T/GXAS 1151—2025

　　人类辅助生殖技术实验室 卵胞浆内单精

　　子显微注射技术操作规程

　　Technical code of pract ice for intracytop lasmic sperm micro inject ion in

　　human ass isted reproduct ive technology laboratory

　　2025 - 11 - 28 发布 2025 - 12 - 04 实施

　　广西标准化协会 发 布

　　前 言

　　本文件参照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由广西医学会提出、归口并宣贯。

　　本文件起草单位：南宁市第二人民医院、山东中医药大学附属医院、武汉大学人民医院、广东省第二人民医院、华中科技大学同济医学院附属协和医院、南昌大学第一附属医院、宜春市妇幼保健院、广西医科大学第一附属医院、广西壮族自治区生殖医院、贵港市人民医院、玉林市妇幼保健院、桂平市人民医院、右江民族医学院附属医院、柳州市妇幼保健院、桂林医科大学第一附属医院。

　　本文件主要起草人：许常龙、杨华、李春苑、牛向丽、江莉、聂玲、李荣、邓星、胡林林、杨曾瑜、宋景艳、蒋满喜、于艺、罗金、张洪、张顺、马小星、罗丹、欧湘红、翟丹梅、覃爱平、黄华、全守能、刘冠良、王俊婷、朱燕、许定飞、陈自洪、邓志华、邹彦、丘苗苗、曾建伟、韦永全、韦雅环、吴雨茵、韦秋敢、吴卓、谭庆英、张剑、邓李文、周玲、李宁、史秋雯、廖兰英、朱艺萍、朱俞欢、曾江辉、周元圆、苑丽华、相珊、曹现岭、郭子珍、牟珍妮、张良、张怡、段超群、季琳。

　　人类辅助生殖技术实验室 卵胞浆内单精子显微注射技术操作规程

　　1 范围

　　本文件界定了人类辅助生殖技术实验室卵胞浆内单精子显微注射技术操作相关的术语和定义及缩略语，确立了卵胞浆内单精子显微注射技术操作程序，规定了人员配备、场所准备、设备、试剂及耗材配备、ICSI的操作指示，描述了操作过程信息的追溯方法。

　　本文件适用于人类辅助生殖技术实验室进行的卵胞浆内单精子显微注射技术操作。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　T/GXAS 1150 人类辅助生殖技术实验室 体外受精-胚胎移植技术操作规程

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　卵胞浆内单精子显微注射 intracytop lasmic sperm injection

　　在显微操作系统的帮助下,在体外直接将单个精子注入卵母细胞浆内使其受精,然后进行胚胎移植的技术。

　　4 缩略语

　　下列缩略语适用于本文件。

　　ICSI：卵胞浆内单精子显微注射(Intracytoplasmic Sperm Injection)

　　OCCC：卵冠丘复合物(Oocyte Corona Cumulus Complex)

　　PVP：聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinyl Pyrrolidone)

　　PN：原核(Pronucleus)

　　5 人员配备及场所准备

　　符合《人类辅助生殖技术规范》的规定。

　　6 设备、试剂及耗材配备

　　6.1 设备

　　包括显微操作系统、培养箱、恒温设备等。

　　6.2 试剂

　　包括玻璃化冷冻液、透明质酸酶、PVP、受精液、卵裂期胚胎培养液及精子洗涤液等。

　　6.3 耗材

　　6.3.1 气体：高纯度 CO2 气体或三气混合气。

　　6.3.2 培养皿和试管，ICSI 操作皿(60 mm 平底培养皿)。

　　6.3.3 其他：移液管、巴斯德吸管、显微操作针、剥卵针(140 μm～155 μm)等。

　　7 ICSI 操作

　　7.1 操作前准备

　　7.1.1 实验室准备程序至捡卵部分的操作程序按 T/GXAS 1150 操作。

　　7.1.2 ICSI 操作皿的制备： 由用于卵子注射的 HEPES/MOPS 操作液微滴和加注精液样本的 PVP 液微滴所组成。ICSI操作皿至少提前 2 h 置于 37 ℃不通 CO2 培养箱中平衡。ICSI操作皿标注患者信息。

　　7.1.3 卵子消化皿：用浓度为 80IU/mL 的透明质酸酶在 60mm 规格的培养皿上半部做数滴消化滴(30 μL/滴～40 μL/滴)，用受精液在培养皿下半部做数滴洗滴(15 μL/滴～20 μL/滴)，覆盖矿物油，所有皿上标注患者信息。

　　7.1.4 胚胎培养皿：在 35mm 规格的培养皿中用卵裂液做数个滴(15 μL/滴～20 μL/滴)，覆盖组织培养用油，所有皿上标注患者信息。

　　7.2 精子处理

　　视精液情况使用密度梯度法或直接离心法等优化精子。

　　7.3 去除颗粒细胞

　　7.3.1 核对患者信息。

　　7.3.2 将 OCCC 置于 80IU/mL 透明质酸酶消化滴中,用 140 μm～155 μm 的剥卵针反复吹打，透明质酸酶消化时间≤1min，去除大部分颗粒细胞，然后迅速移入洗滴内漂洗，继续吹打直至卵子周围的颗粒细胞脱落。将卵子漂洗 3～5 次后，放置最后一滴洗滴中，待用。

　　7.4 显微操作

　　7.4.1 安装 ICSI 注射针、固定针。

　　7.4.2 显微注射操作开始前，核对患者信息。将卵子由卵子消化皿转入 ICSI操作皿的操作液中，精子置于 PVP 液滴中，并将 ICSI操作皿置于倒置显微镜的 37 ℃载物台上，进行显微注射。

　　7.4.3 用注射针制动精子,将精子从尾部吸入。在操作过程中不伤及精子颈部。

　　7.4.4 将卵子微滴移到视野中央，用固定针于 9 点处将卵子固定，极体位于 12 点或 6 点位置，于 3点或 9 点位置(左手进针者)进行注射。

　　7.4.5 注射针穿透透明带并触及胞质膜，随后继续向卵胞质深部进入，回吸少量卵胞质确认卵膜已破，注入精子，注射深度以胞质直径的 1/2～2/3 为宜。

　　7.4.6 所有的卵子注射后放入准备好的胚胎卵裂液培养皿中，并迅速置于 37 ℃ 、6%C02 培养箱中。

　　7.4.7 ICSI 后 16 h～18 h 内，根据有无 2PN 及两个极体来判断是否受精。

　　7.5 注意事项

　　7.5.1 所有的显微操作设备放置适当，保持稳定性;显微操作仪放置在远离震动源(门、电梯、气流造成的震动)的位置，倒置显微镜装有可调节的恒温板。

　　7.5.2 安装 ICSI注射针、固定针时注意避免注射针内产生大量气泡;操作针在插入持针器过程中如遇到较大阻力时不强行插入，检查持针器管路内是否有破损的玻璃等残留物。

　　7.5.3 注射精子时所注入的液体量越少越好，精子注入后慢慢撤出注射针,确保精子不在抽针过程中被带出来。

　　7.5.4 显微镜上配置恒温板，微滴有矿物油覆盖。

　　7.5.5 注射精子后确保胞浆不倒流进入注射针，并注意培养皿在培养箱外的时间，不宜超过 10min。

　　8 操作记录

　　对卵胞浆内单精子显微注射技术操作的试剂及耗材选择、精子处理、卵冠丘复合物处理、显微操作等过程进行记录并长期保存。

　　参 考 文 献

　　[1] YY/T 0995 人类辅助生殖技术用医疗器械 术语和定义

　　[2] 中国医师协会生殖医学专业委员会.卵胞质内单精子注射(ICSI)技术中国专家共识(2023年) [J]. 中华生殖与避孕杂志,2023,43(7) :659-669.

　　[3] 孙莹璞，邓成艳，等.人类辅助生殖技术医生必读[M].北京：人民卫生出版社.2023.2

　　[4] 杨爱军，牛焕付，李晓云，王雪楠，等.人类辅助生殖技术评审手册[M].北京：科学出版社.2024.11

　　[5] 卫生部关于修订人类辅助生殖技术与人类精子库相关技术规范、基本标准和伦理原则的通知

　　(卫科教发{2003｝176号)