T/CHCIA 015-2023 化妆品用原料 聚谷氨酸钠

　　ICS 71.100.70 CCS Y 42

　　团 体 标 准

　　T/CHCIA 015—2023

　　化妆品用原料 聚谷氨酸钠

　　Cosmetic ingredients Sodium polyglutamate

　　2023 - 05 - 11 发布 2023 - 06 - 12 实施

　　中国日用化工协会 发 布

　　前 言

　　本文件按照GB/T 1.1《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件附录A为资料性附录。

　　本文件由中国日用化工协会提出并归口。

　　本文件起草单位：华熙生物科技股份有限公司、山东省食品药品审评查验中心、山东省食品药品检验研究院、中轻日用化学检验认证有限公司。

　　本文件主要起草人：徐桂欣、陆震、孙元军、王秀娟、陈玉娟、贺龙强、李启艳、付杰、曲文杰、温亮亮、姚晨之、田昕、任月辉。

　　化妆品用原料 聚谷氨酸钠

　　1 范围

　　本文件规定了化妆品用原料聚谷氨酸钠的要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输和贮存。本文件适用于微生物发酵制得，用作化妆品原料的聚谷氨酸钠。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　《化妆品安全技术规范》

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3. 1

　　聚谷氨酸钠 sodium polyglutamate

　　聚谷氨酸钠(简称PGA)是由L-谷氨酸和D-谷氨酸通过谷氨酸单体α-氨基和γ-羧基交联结合形成的聚氨基酸化合物。

　　4 分子式、CAS 号、相对分子质量、结构式4. 1 分子式

　　(C5H6NO3Na)n

　　4. 2 CAS 号

　　28829-38- 1

　　4. 3 相对分子质量

　　相对分子质量：1×104 ~2.4×106。

　　4.4 结构式

　　5 要求

　　5. 1 感官要求

　　白色或类白色粉末或颗粒，有轻微特征性气味。

　　5. 2 鉴别

　　参照附录A，试样红外光谱图应与对照品谱图一致。

　　注：参考文献[1]中给出的聚谷氨酸钠谱图可用作鉴别试样的参照。

　　5. 3 理化指标

　　聚谷氨酸钠的理化指标应符合表 1 的规定。

　　表1 聚谷氨酸钠的理化指标

　　5.4 卫生指标

　　聚谷氨酸钠的卫生指标应符合表2的规定。

　　表2 聚谷氨酸钠的卫生指标

　　6 试验方法

　　6. 1 一般要求

　　除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T 6682三级或以上的水。试剂溶液未指明用何种溶液配制时，均指用水配制。

　　6. 2 感官要求

　　按照QB/T 5189进行试验。

　　6. 3 鉴别

　　取干燥的试样约2 mg～3mg，置玛瑙研钵中研细，加约200 mg～300 mg溴化钾，研细，将样品分散均匀，压片;不加样品，同法制备空白片;另取干燥的对照品约2 mg～3mg ，同法制备对照品片。以空白片为背景，对比试样的红外光吸收图谱(4000 cm- 1 ～400 cm- 1)与对照品谱图是否一致。

　　6.4 含量

　　6.4.1 仪器

　　6.4.1.1 电子天平，精度 0.1 mg。

　　6.4.1.2 高效液相色谱仪，配有紫外检测器。

　　6.4.1.3 凝胶色谱柱，规格 300 mm ×8.0 mm(内径)，填料粒径 13 μm，(如 Shodex SB-806 HQ)或有同等效果的凝胶色谱柱。

　　6.4.2 试剂

　　6.4.2.1 水为符合 GB/T 6682 的一级水。

　　6.4.2.2 聚谷氨酸钠对照品。

　　6.4.2.3 无水硫酸钠。

　　6.4.2.4 乙酸。

　　6.4.3 溶液配制

　　6.4.3.1 流动相：称取 28.4 g 无水硫酸钠用适量水溶解，乙酸调节 pH 至 4.0 ，转移至 1 L 容量瓶中用水定容至 1 L 。配好的溶液作为流动相前，需经孔径 0.22 μm 微孔滤膜过滤，超声波脱气 15 min。

　　6.4.3.2 对照溶液：称取 105 ℃干燥至恒重的聚谷氨酸钠对照品 0.1 g(称准至 0.001 g)，用水溶解后转移至 100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度。溶液色谱分析前需经 0.22 μm 微孔滤膜过滤。

　　6.4.3.3 试样溶液(平行制备 2 份)：准确称取试样 0.1 g(称准至 0.001 g)，用水溶解后转移至 100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度。溶液色谱分析前需经 0.22 μm 微孔滤膜过滤。

　　6.4.4 色谱参考条件

　　6.4.4.1 流动相：0.2 mol/L 硫酸钠溶液。

　　6.4.4.2 流动相流速：1.0 mL/min。

　　6.4.4.3 紫外检测波长：210 nm。

　　6.4.4.4 样品进样量：20 μL。

　　6.4.4.5 柱温：35 ℃。

　　6.4.5 测定

　　分别取对照溶液及试样溶液各 20 μL 注入液相色谱仪，记录色谱图，采用外标法计算试样中聚谷氨酸钠的含量。

　　6.4.6 结果计算

　　试样中聚谷氨酸钠含量(X)以质量分数表示，按式(1)计算：

　　X 100% ……………………………………………………(1)

　　式中：

　　As——试样溶液中聚谷氨酸钠峰面积;

　　Wr——对照品称样量，单位为克(g);

　　Z——干燥的对照品中的聚谷氨酸质量分数;

　　Ar——对照溶液中聚谷氨酸钠峰面积;

　　Ws——试样称样量，单位为克(g);

　　h ——试样干燥失重率。

　　6.4.7 结果报告

　　平行测定结果允许相对偏差不得大于2.0% ，取平行测定结果的算术平均值作为测定结果。

　　6.5 pH 值

　　称取试样1.0 g，置锥形瓶中，加100 mL新煮沸放冷的水，放入干净的磁子，将锥形瓶置于磁力搅拌器上搅拌至完全溶解为均一的透明溶液后停止(可通过目视确认)。然后按GB/T 9724测定。

　　6. 6 吸光度

　　6.6.1 仪器

　　6.6.1.1 可见分光光度计。

　　6.6.1.2 电子天平，精度 0.01 g。

　　6.6.2 测定

　　称取试样4.0 g至盛有100 mL水的锥形瓶中，溶解后，以水作空白，在400 nm波长处用1 cm厚度的比色皿测定溶液的吸光度。

　　6. 7 特性黏数

　　6.7.1 仪器

　　6.7.1.1 乌氏黏度计(图 1)，毛细管内径 0.53 mm。

　　图 1 乌氏黏度计

　　6.7.1.2 G3 垂熔漏斗。

　　6.7.1.3 恒温水浴，控温精度±0.05 ℃。

　　6.7.1.4 秒表，分度 0.01 秒。

　　6.7.1.5 电子天平，精度 0.1 mg。

　　6.7.1.6 电子天平，精度 0.01 g。

　　6.7.2 试剂

　　6.7.2.1 1.2 mol/L 氯化钠溶液：称取氯化钠 70.14 g ，加 1000 mL 水溶解。

　　6.7.2.2 试样溶液的制备：称取试样 W1 约 0.6 g(称准至 0.001 g)，加适量 1.2 mol/L 氯化钠溶液，置振荡器上使溶解，转移置 100 mL 容量瓶，1.2 mol/L 氯化钠溶液定容至刻度，摇匀，作为初始溶液;称取上述溶液 W2(注：W2 不确定，需要根据测定的试样溶液流出时间调整，t1 应是 t0 的 1.3～1.5 倍)至100 mL 容量瓶中，加 1.2 mol/L 氯化钠溶液稀释至刻度，摇匀，作为试样溶液。

　　6.7.3 测定

　　6.7.3.1 溶剂流出时间(t0)的测定

　　取经G3垂熔漏斗滤过的1.2 moL/L氯化钠溶液适量，弃去初滤液，取续滤液(不少于7 mL)沿洁净、干燥的乌氏黏度计(见图1)的管2内壁注入B中，将黏度计垂直固定于恒温水浴(水浴温度25 ℃±0.1 ℃)中，并使水浴液面高于球C ，放置15 min ，将管口1 、3各接一乳胶管，夹住管口3的胶管，自管口1处抽气，使试样溶液的液面缓缓升高到C的中部，先放开管口3，再放开管口1，使试样溶液在管内自然下落，用秒表准确记录液面自测定线m1 下降到m2处的流出时间;重复测定至少两次，两次测定值应相同，且t0应大于100秒。

　　6.7.3.2 试样溶液流出时间(t1)的测定

　　取用G3垂熔漏斗滤过的适量试样溶液(6.7.2.2)，按照溶剂流出时间的测定方法进行测定，重复测定至少两次，两次测定值相差不得超过0.2秒，取两次的平均值为试样溶液的流出时间(t1)。t1/t0应在1.3～1.5之间，否则应调整W2后再测。

　　6.7.4 计算

　　按式(2)计算试样溶液浓度 c(g/dL)：

　　c = W1×W2×(1__h) × 100································································ ·· (2)

　　100×100×p25

　　式中：

　　c ——试样溶液浓度，单位为克每分升(g/dL);

　　W1——试样质量，单位为克(g);

　　W2——初始溶液质量，单位为克(g);

　　h——试样干燥失重率;

　　ρ25——试样溶液在25 ℃的密度，1.000g/mL;

　　100——试样定容体积，单位为毫升(mL);

　　100——毫升与分升的换算系数。

　　按式(3)计算特性黏数 η(dL/g)：

　　η = ······································································ (3)

　　c

　　式中：

　　η——试样溶液的特性黏数，单位为分升每克(dL/g);

　　t1——试样溶液的平均流出时间，单位为秒(s);

　　t0——溶剂的流出时间，单位为秒(s);

　　c——试样溶液浓度(以干基计)，单位为克每分升(g/dL)。

　　6.7.5 测试有效的判定

　　1) t0 应大于 100 秒;

　　2) 试样溶液的流出时间 t1 应是 t0 的 1.3～1.5 倍;

　　3) 满足以上两个条件测试才有效，否则调整第二步稀释的称样量。

　　6.8 相对分子质量

　　6.8.1 仪器

　　6.8.1.1 高效液相色谱-激光光散射联用系统(配多角度激光检测器及示差检测器)。

　　6.8.1.2 电子天平，精度 0.1 mg。

　　6.8.2 试剂

　　6.8.2.1 水为 GB/T 6682 中的一级水。

　　6.8.2.2 氯化钠。

　　6.8.3 色谱条件

　　6.8.3.1 色谱柱：凝胶色谱柱，规格 300 mm×7.8 mm(内径)，填料粒径 13 μm，(如 TSK GEL GMPWxl)或达到同等效果的凝胶色谱柱。

　　6.8.3.2 流动相：0.2 mol/L 氯化钠溶液。

　　6.8.3.3 流速：0.6 mL/min。

　　6.8.3.4 进样量：500 µL。

　　6.8.3.5 柱温：35 ℃。

　　6.8.4 检测方法

　　6.8.4.1 试剂配制

　　流动相：精密称取氯化钠11.7 g ，加纯化水使其溶解并定容至1 000 mL ，0.22 µm滤膜过滤，即为0.2 mol/L氯化钠溶液。

　　试样溶液：称取待测样品0.005 g，用流动相充分溶解并稀释至10 mL，摇匀，再用流动相稀释10倍，即为试样溶液，进样前需经0.22 µm滤膜过滤。

　　6.8.4.2 样品测定

　　取试样溶液 500 µL，注入高效液相色谱-激光光散射联用系统，再按 6.8.3 所述色谱条件测定，记录色谱图。选定双信号的基线及色谱峰，输入折光指数增量，用专用数据处理软件(如 ASTRA 软

　　件)计算试样的相对分子质量及相对分子质量分布。

　　6.8.4.3 折光指数增量(dn/dc 值)的测定

　　折光指数增量是高分子溶液折光指数的浓度依赖性。

　　测定方法：准确称取聚谷氨酸钠纯品，用流动相配制成 5~6 个浓度梯度的溶液，用折光指数增量

　　测定程序，按照流动相、低浓度到高浓度的梯度溶液、流动相的顺序将相应溶液过滤后注入示差检测器，进样完毕后选定基线及各梯度折射率、输入浓度梯度信息，用专用数据处理软件计算折光指数增量。

　　注：因高聚物dn/dc值仅与物质种类和溶剂有关，因此在不改变流动相的前提下dn/dc值在首次确定后无需每次测定。

　　6.9 干燥失重

　　按照 GB/T 6284 规定的方法进行。

　　6. 10 卫生指标

　　聚谷氨酸钠的卫生指标按照《化妆品安全技术规范》进行测定。

　　7 检验规则

　　7. 1 批次

　　产品按批检验，以一次投料生产的产品为1批。

　　7.2 抽样

　　按GB/T 6679规定进行，将所抽样品混合均匀后分成2份，其中一份用于检查，另一份留样备查。

　　7.3 出厂检验

　　7.3.1 每批产品应由生产企业的质量检验部门按本标准检验合格后附合格证明方可出厂。

　　7.3.2 出厂检验项目为感官指标、聚谷氨酸钠含量、pH 、吸光度、特性黏数、相对分子质量、干燥失重和菌落总数。

　　7.4 型式检验

　　7.4.1 型式检验项目为本标准中规定的全部项目。

　　7.4.2 有下列情况之一时，应进行型式检验:

　　a) 产品配方、原料、工艺或主要生产设备有较大改变时。

　　b) 停产 6 个月以上恢复生产时。

　　c) 出厂检验与上次型式检验结果有较大差异时。

　　d) 国家质量监督机构按有关规定需要抽检时。

　　7.5 判定规则

　　a) 检验项目全部符合本标准的规定，判该批产品为合格产品。

　　b) 微生物指标如有一项不符合本标准规定的要求时，即判该批产品为不合格。

　　c) 除微生物指标外，其他项目检验结果如有一项及以上为不合格，应在同批产品中加倍抽样复检，以复检结果为准。若复检项目仍有一项不合格，则判该批产品为不合格品。

　　8 标志、包装、运输、贮存

　　8. 1 标志

　　包装标志应符合 GB/T 191 的规定。

　　8. 2 包装

　　本产品宜内用高密度聚乙烯(HDPE)瓶、聚乙烯塑料袋等卫生、无毒、无害、密封、防潮的包材，应按明示的净重包装，外用瓦楞纸箱等包材包装。

　　8. 3 运输

　　产品在运输过程中应轻搬轻放，防止日晒、雨淋。

　　8.4 贮存

　　密封，阴凉处保存。保质期为 2 年。

　　A

　　A

　　附 录 A

　　(资料性)

　　聚谷氨酸钠对照品红外光谱图

　　图A.1 聚谷氨酸钠对照品红外光谱图

　　参 考 文 献

　　[ 1] Ho G H , Ho T I , Hsieh K H , et al. Polyglutamic Acid Produced by Bacillus subtilis (natto): Structural Characteristics, Chemical Properties and Biological Functionalities[J]. WILEY‐VCH Verlag, 2006(6).